Electroforeza proteinelor serice

Serul pacientului este pus pe un mediu special (ex. celuloză, agar) și apoi se aplică un curent electric de o anumită intensitate pentru o perioadă de timp în care proteinele vor migra de la polul negativ spre cel pozitiv. Albumina migrează și ajunge la polul pozitiv iar gama-globulinele vor rămâne la polul negativ, rezultând fracțiile specifice fiecărei proteine.
Electroforeza proteinelor serice este o metodă simplă, puțîn costisitoare de separare a proteinelor din sânge pe baza încărcăturii electrice, dimensiune și formă. În serul sanguin există două categorii majore de proteine: albumina și globulină. Albumina se găsește în cantitatea cea mai mare iar globulinele deși sunt în cantitate mai mică ele sunt baza interpretării electroforezei. Sunt 5 categorii de globuline: alfa-1, alfa-2, beta-1, beta-2 și gama.
Cu ajutorul etapei de colorare fracțiile sunt puse în evidență și pot fi interpretate cu ajutorul cititoarelor care măsoară densitatea optică. Rezultatele sunt exprimate pentru fiecare tip de proteină în parte și se exprimă sub formă: normal, scăzut, crescut.

 

Instrucțiuni de lucru

Se lucrează pe o suprafață curată și dreapta, cu toate materialele necesare la îndemână. Se citesc cu atenție instrucțiunile.

 

Pregătire soluții

TAMPON

Într-un clinindru de 100ml se pun 10ml soluție tampon din flacon și 90ml apă distilată și se omogenizează. Este foarte important de respectat raportul 1:9!

 

COLORANT

Soluția este gata de lucru

 

DECOLORANT

Într-un clinindru de 100ml se pun 10ml soluție decolorant și 90ml apă distilată și se omogenizează. Este foarte important de respectat raportul 1:9!

 

SOLUTIE FIXARE

Soluția este gata de lucru

 

Pregatire probe

Serul poate să fie proaspăt sau păstrat la 2-8°C maxim 72 de ore. Nu se lucrează seruri lipemice sau hemolizate.

Se diluează serul cu soluție tampon: 20µl ser + 120µl soluție tampon într-un flacon eppendorf.

 

 

Aplicare probe

Se deschide placa de gel pe care se va aplica serul diluat al pacientului și se așează pe un suport (coală albă de hârtie).

Se aplică hârtia de filtru pe folie în dreptul punctelor în care vor fi aplicate probele pentru a se elimină excesul de umezeală, câteva secunde.

Se ridică hârtia de filtru și imediat se poziționează aplicatorul pe care se pipeteaza probele, cu mare grijă astfel încât să facă contact complet cu gelul.

Înainte de aplicarea fiecărei probe amestecul de ser cu tampon se va agita.

Se pipetează 3,5 µl de ser diluat de-a lungul fiecărei fante și se lasă să se absoarbă complet timp de 5-8 minute, nu mai mult de 10 minute, excesul de ser se va îndepărta cu ajutorul unei hărtii de filtru apoi se îndepărtează aplicatorul.

 

Migrarea

Se pipetează 35 ml soluție tampon în fiecare parte a cuvei (+/-) (se recomandă schimbarea tamponului după fiecare migrare).

Se pune folia în cuvă astfel încât să se respecte + de pe folie cu + de pe cuvă și – de pe folie cu – de pe cuvă și se acoperă cuva.

Se fixează parametrii specificați în protocol și se pornește migrarea.

După terminarea migrării se scoate imediat folia și se introduce în baia de fixare cu gelul în sus timp de 7-10 minute.

 

Uscarea

După etapa de fixare folia este scoasă din baia de soluție și pusă în etuvă la minim 90°C pentru aproximativ 20 minute.

 

Colorare

După uscarea foliei aceasta se pune în baia de colorant 6-8 minute.

 

Decolorare

Se îndepărtează din baie soluția de colorare și se pune soluție de decolorare peste folie. Aceasta se decolorează în 2-3 băi succesive. Folia este lăsată să se usuce complet (eventual la etuvă la 70-80°C).

 

Rezultat